Peg10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-431278-ACT

O Peg10 de camundongo (paternally expressed gene 10) codifica uma proteína domesticada derivada de retrotransposon, com características semelhantes às de Gag e Pol, que promove a sobrevivência celular, a proliferação e a diferenciação específica de linhagem. O Peg10 é regulado por imprinting genômico e contribui para programas de desenvolvimento, incluindo o crescimento placentário e embrionário, por meio do controle transcricional e pós-transcricional da expressão gênica. No nível celular, o Peg10 tem sido associado a vias que governam a resistência à apoptose e a proteostase, e sua desregulação é frequentemente estudada no contexto de transformação oncogênica, remodelamento tecidual e sinalização de crescimento aberrante. Essas propriedades tornam o Peg10 um alvo relevante para investigar redes de genes imprintados, a biologia do desenvolvimento e alterações associadas a doenças nos circuitos de regulação gênica.

Peg10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Peg10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Peg10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Peg10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Peg10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Peg10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Peg10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Peg10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Peg10 em células tumorais com expressão de Peg10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.