Peg1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421634-ACT

O gene Mest em camundongos codifica a proteína imprintada Peg1, um regulador do crescimento embrionário, do desenvolvimento placentário e da homeostase metabólica pós-natal. Peg1 tem sido associada à adipogênese, ao balanço energético e a decisões de destino celular por meio de mecanismos de controle epigenético e de programas de sinalização que influenciam a diferenciação e a remodelação tecidual. A expressão alterada de Mest/Peg1 é frequentemente usada como marcador de mudanças no estado de imprinting e na programação do desenvolvimento, com relevância para fenótipos associados à obesidade e para a desregulação do crescimento em sistemas modelo. Na pesquisa biomédica, Mest oferece um locus acessível para investigar como a regulação gênica dependente da origem parental molda vias de desenvolvimento e metabólicas.

Peg1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mest sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Peg1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mest em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mest, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Peg1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mest nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Peg1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Peg1 em células tumorais com expressão de Mest silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.