PDPK1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401731-ACT

A PDPK1 humana (3-fosfoinositídeo‑dependente proteína quinase 1) é uma quinase central da família AGC que conecta a sinalização por fosfoinositídeos ao controle de crescimento e sobrevivência mediado por fosforilação. Ativada a jusante de PI3K por meio da ligação ao PIP3, a PDPK1 fosforila substratos-chave como AKT em Thr308 e múltiplas quinases AGC, incluindo S6K, SGK e várias isoformas de PKC, integrando sinais que regulam o metabolismo, a síntese proteica, a progressão do ciclo celular e respostas ao estresse. Por meio desses nós, a PDPK1 modula saídas relacionadas a mTOR e a dinâmica mais ampla de redes de quinases que influenciam decisões de linhagem e a plasticidade celular. A sinalização desregulada de PDPK1 é frequentemente estudada no contexto da ativação oncogênica da via PI3K–AKT e de fenótipos metabólicos relevantes para a biologia do câncer e para tecidos responsivos à insulina.

PDPK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PDPK1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PDPK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PDPK1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PDPK1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PDPK1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PDPK1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PDPK1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PDPK1 em células tumorais com expressão de PDPK1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.