PDGF Receptor beta/PDGFRB Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400187-ACT

PDGFRB codifica o receptor beta do fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGFRβ), uma tirosina-quinase de receptor que se liga ao PDGF-BB e a ligantes relacionados para regular a proliferação, a sobrevivência e a migração de células mesenquimais. Após a ativação, o PDGFRβ inicia a autofosforilação e propaga a sinalização pelas vias PI3K–AKT, RAS–MAPK, PLCγ–PKC e STAT, coordenando a remodelação do citoesqueleto e as interações com a matriz extracelular. Esse receptor é central para o desenvolvimento vascular e o recrutamento de pericitos, sustentando a estabilização dos vasos e processos de reparo tecidual. A sinalização desregulada de PDGFRB ou fusões aberrantes de PDGFRB estão implicadas em estados fibroproliferativos, angiogênese patológica e na comunicação tumor–estroma, tornando-o um alvo-chave para estudos mecanísticos de biologia do estroma.

PDGF Receptor beta/PDGFRB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PDGFRB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PDGF Receptor beta/PDGFRB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PDGFRB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PDGFRB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PDGF Receptor beta/PDGFRB. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PDGFRB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PDGF Receptor beta/PDGFRB no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PDGF Receptor beta/PDGFRB em células tumorais com expressão de PDGFRB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.