PDGF-A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400711

Visão geral

O PDGFA codifica o fator de crescimento derivado de plaquetas A (PDGF-A), um fator de crescimento dimérico secretado que sinaliza principalmente por meio do PDGFRα para regular a proliferação, a migração e a sobrevivência de células mesenquimais. O PDGF-A é um importante mediador de respostas mitogênicas e quimiotáticas que se conectam às vias de sinalização MAPK/ERK e PI3K/AKT, contribuindo para a remodelação da matriz extracelular, o suporte à angiogênese e a comunicação entre estroma e epitélio. A desregulação da sinalização PDGF-A/PDGFR tem sido implicada na remodelação fibrótica e na ativação do estroma associada a tumores, sendo frequentemente estudada por seus efeitos no controle do ciclo celular e na dinâmica do microambiente tecidual. O PDGFA também é relevante em processos de desenvolvimento e em modelos de reparo de feridas, nos quais gradientes parácrinos de fatores de crescimento moldam o destino e a motilidade celular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PDGF-A (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PDGFA em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PDGFA, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PDGFA na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PDGF-A.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PDGFA para a investigação da sinalização de PDGF-A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PDGFA críticos para a função PDGF-A
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PDGFA para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PDGF-A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PDGF-A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PDGFA. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PDGF-A Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PDGF-A (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PDGFA para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PDGFA definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.