PDCD1LG2/PD-L2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404344-ACT

PDCD1LG2 (PD-L2) é um ligante imunorregulador da família B7 que se liga ao PD-1 (PDCD1) em células T para modular a ativação específica por antígeno, a produção de citocinas e a tolerância periférica. Sua expressão em células apresentadoras de antígeno e a expressão induzível em tecidos inflamados integram sinais de programas transcricionais conduzidos por interferon e por inflamação, que moldam o priming (sensibilização) das células T e sua função efetora. O PD-L2 contribui para a sinalização de checkpoint imune e pode influenciar o equilíbrio entre ativação e supressão imunes em microambientes linfoides e teciduais. A expressão desregulada de PDCD1LG2 tem sido associada a alterações na imunidade antitumoral, fenótipos de infecção crônica e estados inflamatórios relacionados à autoimunidade, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos de sinalização imune.

PDCD1LG2/PD-L2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PDCD1LG2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PDCD1LG2/PD-L2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PDCD1LG2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PDCD1LG2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PDCD1LG2/PD-L2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PDCD1LG2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PDCD1LG2/PD-L2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PDCD1LG2/PD-L2 em células tumorais com expressão de PDCD1LG2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.