Pdcd-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403008-ACT

PDCD1 codifica a proteína 1 de morte celular programada (PD‑1; Pdcd‑1), um receptor inibitório expresso principalmente em células T ativadas e em outros subconjuntos imunológicos, que restringe a sinalização do receptor de antígeno para manter a tolerância periférica. Após a ligação aos seus ligantes, o PD‑1 recruta fosfatases que atenuam a sinalização proximal do TCR, limitando a atividade das vias PI3K–AKT e RAS–MAPK e moldando a produção de citocinas, bem como programas de proliferação e sobrevivência. Esse eixo de checkpoint é central para a homeostase imune e está frequentemente implicado em estados de exposição crônica a antígenos, nos quais a expressão sustentada de PDCD1 se associa à disfunção de células T e a pontos de ajuste inflamatórios alterados. Por isso, a regulação de PDCD1 é amplamente estudada em contextos de imunologia tumoral, modelos de infecção persistente, autoimunidade e reprogramação transcricional relacionada à resposta imune.

Pdcd-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PDCD1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pdcd-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PDCD1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PDCD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pdcd-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PDCD1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pdcd-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pdcd-1 em células tumorais com expressão de PDCD1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.