PCNA Double Nickaseプラスミド (h): sc-400037-NIC

PCNA（proliferating cell nuclear antigen：増殖細胞核抗原）は、二本鎖DNAを取り囲む保存性の高いDNAスライディングクランプであり、複製ポリメラーゼのプロセシビティ（連続伸長性）を高めるとともに、複製・修復複合体の組み立てを協調的に制御します。PCNAはPIP-boxモチーフをもつタンパク質のための中心的な足場として機能し、ユビキチン化やSUMO化などの翻訳後修飾を介したシグナルを統合することで、損傷乗り越え合成（TLS）、テンプレートスイッチング、ならびに修復経路の選択を制御します。PCNAはS期進行、岡崎フラグメント成熟、そして複数のDNA損傷応答過程に必須であり、複製ストレスをチェックポイント制御やクロマチン再構築へと結び付けます。PCNA依存的な複製・修復プログラムの破綻は、ゲノム不安定性の表現型と広く関連しており、がん、神経変性、その他のDNA維持機構の異常に関わる疾患領域で研究されています。

PCNA ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PCNA 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PCNA内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PCNAの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PCNAが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。