PCIF1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-407384-NIC

PCIF1（phosphorylated CTD interacting factor 1）はmRNAキャップに関連するメチルトランスフェラーゼであり、m7Gキャップに隣接する転写開始後最初のヌクレオチドにある2′-O-メチルアデノシン（Am）のN6位メチル化（m6Am）を触媒し、キャップ近傍のRNA修飾の様相を形成します。この活性を介してPCIF1はmRNAの安定性、翻訳効率、ならびにRNAプロセシングやエピトランスクリプトーム制御と交差する転写産物特異的な遺伝子発現プログラムに影響を与えます。PCIF1依存的なm6Amは、転写後制御を通じて細胞ストレス応答や発生・増殖シグナルの出力を調節することに関連づけられています。キャップ近傍メチル化およびPCIF1発現の破綻は、腫瘍生物学や免疫関連遺伝子発現などの文脈で検討されており、RNA修飾によって駆動される表現型の機構解明研究における重要性が示されています。

PCIF1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PCIF1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PCIF1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PCIF1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PCIF1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。