Plásmido CRISPR de Activación (h) PCDH20: sc-406005-ACT

PCDH20 codifica la protocadherina-20, una proteína de adhesión célula–célula dependiente de calcio que contribuye a la arquitectura tisular y a la señalización en contextos epiteliales y neuronales. Como parte de la superfamilia de las protocadherinas/cadherinas, PCDH20 influye en la comunicación mediada por contacto, la organización del citoesqueleto y procesos vinculados a la polaridad y la motilidad celular. Se ha informado de una expresión alterada de PCDH20 en múltiples cánceres, donde los cambios en los programas de adhesión y en la señalización asociada pueden afectar la invasión y el potencial metastásico. Debido a que las moléculas de adhesión se conectan con vías como Wnt/β-catenina y otras redes de señalización de uniones celulares, PCDH20 se estudia con frecuencia por su papel en la diferenciación, la biología tumoral y las interacciones con el microambiente.

PCDH20 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PCDH20 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PCDH20 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PCDH20 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PCDH20, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PCDH20. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PCDH20 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PCDH20 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PCDH20 en células tumorales con expresión de PCDH20 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.