paxillin Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422546-ACT

O gene Pxn de camundongo codifica a paxilina, um adaptador de adesão focal que coordena a sinalização de integrinas com a remodelagem do citoesqueleto de actina para regular a adesão celular, o espalhamento e a migração direcional. A paxilina atua como plataforma de montagem (“scaffold”) para quinases e reguladores de GTPases nos locais de adesão, conectando sinais da matriz extracelular a vias como FAK/Src, PI3K-AKT e a sinalização da família Rho, que controlam forças de tração e a mecanotransdução. Por meio dessas redes, a paxilina influencia proliferação, sobrevivência e dinâmicas epitélio–mesenquimais, tornando-se relevante para estudos de comportamento celular invasivo e remodelamento tecidual. A desregulação da sinalização da paxilina e do turnover de adesões focais é comumente investigada em modelos de progressão do câncer, reparo de feridas e microambientes inflamatórios.

paxillin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Pxn sem alterar a sequência de ADN subjacente.

paxillin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Pxn em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Pxn, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de paxillin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Pxn nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de paxillin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via paxillin em células tumorais com expressão de Pxn silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.