Pax-7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422120-ACT

O gene Pax7 de camundongo codifica o fator de transcrição Pax-7, um regulador central da especificação, quiescência e autorrenovação das células satélite do músculo esquelético durante o desenvolvimento e a regeneração no adulto. Pax-7 coordena programas gênicos miogênicos ao interagir com o remodelamento da cromatina e com redes transcricionais determinantes de linhagem que influenciam o equilíbrio entre proliferação e diferenciação. Alterações na atividade de Pax-7 perturbam a homeostase muscular e são amplamente estudadas em contextos de regeneração comprometida, modelos de perda muscular e distrofias, e na biologia do rabdomiossarcoma, em que programas de identidade miogênica estão desregulados. Como regulador do desenvolvimento, Pax-7 também é usado para investigar decisões de destino de células-tronco e vias de reparo tecidual em sistemas murinos.

Pax-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Pax7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pax-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Pax7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Pax7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pax-7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Pax7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pax-7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pax-7 em células tumorais com expressão de Pax7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.