Pax-5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400842-ACT

PAX5 codifica o fator de transcrição específico de células B Pax-5, um regulador mestre do compromisso e da manutenção da linhagem que coordena a expressão dos genes de imunoglobulinas, a competência para recombinação V(D)J e a repressão de programas hematopoéticos alternativos. O Pax-5 molda a acessibilidade da cromatina e as redes transcricionais ao cooperar com corregradores para controlar vias de diferenciação, proliferação e sobrevivência durante a linfopoiese B. Alterações na atividade de PAX5 estão fortemente associadas ao desenvolvimento desregulado de células B e são frequentemente implicadas na biologia de doenças hematológicas, particularmente em contextos de malignidades de células B. Como regulador transcricional nodal, PAX5 oferece um ponto de entrada viável para estudar circuitos de regulação gênica, controle epigenético e integração de sinalização em modelos de células imunes.

Pax-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PAX5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pax-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PAX5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PAX5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pax-5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PAX5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pax-5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pax-5 em células tumorais com expressão de PAX5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.