Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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PAR4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-431134
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PAR4 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico PAR4, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PAR4 Anticorpo (A-10): sc-1666
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PAR4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-431134 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O gene **Pawr** de camundongo codifica o **PAR4** (*prostate apoptosis response 4*), uma proteína rica em prolina e contendo um motivo **zíper de leucina**, que modula programas transcricionais responsáveis por decisões de destino celular. O PAR4 promove sinalização apoptótica e pode antagonizar vias pró-sobrevivência, incluindo interações que influenciam a atividade do **NF-κB** e cascatas de sinalização de proteínas quinases, como respostas dependentes de **PKC**. Ele tem sido associado a respostas ao estresse celular, diferenciação e regulação do citoesqueleto, graças à sua capacidade de atuar como plataforma (scaffold) para complexos de sinalização e de regular a expressão gênica. A atividade desregulada de **PAWR/PAR4** tem sido associada a limiares de apoptose alterados na biologia do câncer e a processos relacionados à inflamação e à neurodegeneração, nos quais a morte celular induzida por estresse e a sinalização de sobrevivência estão perturbadas.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PAR4 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Pawr em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Pawr, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Pawr na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PAR4.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Pawr para a investigação da sinalização de PAR4, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Pawr críticos para a função PAR4
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Pawr para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo PAR4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PAR4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Pawr. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo PAR4 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PAR4 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Pawr para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Pawr definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.