PAPP-A2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412949-ACT

PAPPA2 codifica a pappalisina-2 (PAPP-A2), uma metaloproteinase secretada que regula a biodisponibilidade do fator de crescimento semelhante à insulina (IGF) ao clivar proteoliticamente proteínas ligantes de IGF (IGFBPs), com forte atividade sobre a IGFBP-3 e a IGFBP-5. Ao modular a liberação de IGF-I/IGF-II a partir de complexos inibitórios, a PAPP-A2 influencia cascatas de sinalização do receptor de IGF que coordenam o crescimento celular, a diferenciação e a remodelação associada à matriz extracelular. Esse eixo é fundamental para o controle endócrino e parácrino do desenvolvimento esquelético e da homeostase metabólica. Alterações na função ou na expressão de PAPPA2 têm sido associadas à desregulação da sinalização de IGF e a fenótipos de crescimento, sustentando seu estudo em biologia do desenvolvimento e em vias reguladas por hormônios.

PAPP-A2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PAPPA2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PAPP-A2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PAPPA2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PAPPA2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PAPP-A2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PAPPA2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PAPP-A2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PAPP-A2 em células tumorais com expressão de PAPPA2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.