PAPD5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-412997-ACT

Das humane PAPD5 kodiert eine nicht-kanonische Poly(A)-Polymerase (auch als TENT4B bekannt), die sich überwiegend im Zellkern befindet und über RNA-Tailing an der posttranskriptionellen Genregulation beteiligt ist. PAPD5 arbeitet mit RNA-Überwachungs- und Abbaumaschinerien zusammen, um RNA-Stabilität und Qualitätskontrolle zu beeinflussen, die Homöostase des Transkriptoms zu formen und Prozesse wie Stressantworten und Differenzierung zu modulieren. Durch die Steuerung des RNA-Schicksals ist PAPD5 in übergeordnete Signal- und Regulationswege eingebunden, die die Robustheit der Genexpression bestimmen, darunter die Ribonukleoprotein-Biogenese und der nukleäre RNA-Umsatz. Eine dysregulierte PAPD5-Aktivität wurde in der Literatur mit veränderten RNA-Metabolismus-Phänotypen in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie sowie für erbliche Erkrankungen mit aberranter RNA-Prozessierung relevant sind.

PAPD5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PAPD5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PAPD5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PAPD5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PAPD5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PAPD5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PAPD5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PAPD5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PAPD5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PAPD5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.