Pannexin-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424967-ACT

O gene Panx1 de camundongo codifica a pannexina-1, um canal de grande poro na membrana plasmática que medeia a liberação de ATP e a sinalização purinérgica para coordenar a comunicação intercelular. A atividade da pannexina-1 influencia o fluxo de Ca2+, respostas relacionadas ao inflamassoma e a modulação da sinalização imune inata, frequentemente em interseção com vias de receptores P2X/P2Y e mecanismos de abertura/fechamento do canal de pannexina. Em diversos tipos celulares, a PANX1 contribui para a regulação de sinais de “encontre-me” associados à apoptose, respostas mecanossensíveis e liberação de mediadores inflamatórios. A sinalização desregulada de PANX1 tem sido associada na literatura à neuroinflamação, a respostas a lesão isquêmica e a alterações na sinalização do microambiente tumoral–imune, sustentando seu estudo em modelos relevantes para doenças, sem implicar utilidade clínica.

Pannexin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Panx1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pannexin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Panx1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Panx1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pannexin-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Panx1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pannexin-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pannexin-1 em células tumorais com expressão de Panx1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.