PADI4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402657-ACT

PADI4 codifica a peptidil arginina deiminase 4 (PAD4), uma enzima dependente de cálcio que converte resíduos de arginina em citrulina em histonas e outros substratos, modulando assim a estrutura da cromatina e os programas de transcrição. Por meio da citrulinação de histonas, PADI4 se integra à regulação epigenética da expressão de genes inflamatórios, à diferenciação de granulócitos e às respostas imunes inatas, incluindo vias ligadas à formação de armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs). Alterações na atividade de PADI4 têm sido associadas a condições autoimunes e inflamatórias e também foram estudadas no contexto da biologia tumoral, em que o remodelamento epigenético influencia o estado celular. Essas características fazem de PADI4 um alvo útil para investigar a sinalização dependente de citrulinação e o controle transcricional em modelos relevantes para imunologia e câncer.

PADI4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PADI4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PADI4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PADI4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PADI4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PADI4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PADI4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PADI4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PADI4 em células tumorais com expressão de PADI4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.