PAcP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405118-ACT

O ACPP humano codifica a fosfatase ácida prostática (PAcP), uma fosfomonoesterase secretada e intracelular que modula a sinalização dependente de fosfato e programas de diferenciação celular. No epitélio prostático, a PAcP tem sido associada à regulação dos estados de fosforilação em tirosina e de vias a jusante que influenciam a transcrição responsiva a andrógenos e o controle do crescimento. Alterações na expressão e na atividade de ACPP/PAcP são frequentemente estudadas no contexto da biologia da próstata, incluindo mudanças associadas à progressão tumoral e à plasticidade celular. Como um marcador enriquecido em tecido com funções de sinalização, o ACPP oferece um ponto de partida útil para dissecar a remodelação de redes impulsionada por fosfatases em modelos relevantes para o câncer.

PAcP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ACPP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PAcP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ACPP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ACPP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PAcP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ACPP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PAcP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PAcP em células tumorais com expressão de ACPP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.