PACAP Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402741-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PACAPO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase PACAP (h) e o Plasmídeo Double Nickase PACAP (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para ADCYAP1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PACAP Anticorpo (F-2): sc-166180
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PACAP Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-402741-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PACAP Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-402741-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADCYAP1 codifica o polipeptídeo ativador da adenilato ciclase hipofisária (PACAP), um neuropeptídeo que sinaliza principalmente por meio do PAC1 (ADCYAP1R1) e dos receptores VPAC para estimular cAMP/PKA, PLC/Ca²⁺ e programas transcricionais a jusante regulados por CREB e MAPK. O PACAP modula a excitabilidade neuronal, a secreção neuroendócrina e circuitos responsivos ao estresse, além de influenciar funções imunes e vasculares por meio de sinalização mediada por GPCR. Em modelos celulares, a atividade de ADCYAP1 interage com vias que controlam a plasticidade sináptica, a homeostase metabólica e o tônus neuroinflamatório. A desregulação da sinalização de PACAP tem sido associada a fenótipos neurológicos e neuropsiquiátricos, incluindo alterações no processamento de estresse e dor e mecanismos relacionados à enxaqueca, tornando o ADCYAP1 um alvo relevante para estudos mecanísticos da biologia de neuropeptídeos via GPCR.
PACAP O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ADCYAP1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ADCYAP1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ADCYAP1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ADCYAP1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.