PACAP Plasmide Double Nickase (h): sc-402741-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PACAP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PACAP Double Nickase Plasmid (h) e il PACAP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ADCYAP1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PACAP Antibody (F-2): sc-166180
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PACAP Plasmide Double Nickase (h) | sc-402741-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PACAP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402741-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADCYAP1 codifica per il polipeptide attivante l’adenilato ciclasi ipofisaria (PACAP), un neuropeptide che segnala principalmente attraverso PAC1 (ADCYAP1R1) e i recettori VPAC per stimolare cAMP/PKA, PLC/Ca²⁺ e i programmi trascrizionali a valle regolati da CREB e MAPK. PACAP modula l’eccitabilità neuronale, la secrezione neuroendocrina e i circuiti responsivi allo stress, e influenza anche funzioni immunitarie e vascolari tramite segnalazione mediata da GPCR. In modelli cellulari, l’attività di ADCYAP1 interseca vie che controllano la plasticità sinaptica, l’omeostasi metabolica e il tono neuroinfiammatorio. Una segnalazione PACAP deregolata è stata associata a fenotipi neurologici e neuropsichiatrici, inclusi un’alterata elaborazione di stress e dolore e meccanismi legati all’emicrania, rendendo ADCYAP1 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici della biologia dei neuropeptidi e dei GPCR.
PACAP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADCYAP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADCYAP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADCYAP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADCYAP1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.