PACAP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419000
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PACAP O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico PACAP, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PACAP Anticorpo (F-2): sc-166180
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PACAP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419000 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Adcyap1 codifica o polipeptídeo ativador da adenilato ciclase hipofisária (PACAP), um neuropeptídeo conservado que sinaliza principalmente por meio do PAC1 (ADCYAP1R1) e de GPCRs de classe B relacionados para regular as vias de cAMP/PKA, MAPK/ERK e Ca²⁺ intracelular. Em tecidos de camundongo, o PACAP modula a neurotransmissão, o neurodesenvolvimento, a secreção neuroendócrina e as respostas celulares ao estresse, influenciando a plasticidade sináptica, a homeostase circadiana e hipotalâmica e a regulação autonômica. A sinalização de PACAP se cruza com programas inflamatórios e metabólicos ao moldar a liberação de citocinas e a sinalização de sobrevivência celular em compartimentos neurais e periféricos. A desregulação do eixo ADCYAP1/PACAP tem sido associada na literatura à neurobiologia relacionada ao estresse, ao processamento da dor e a mecanismos neuroinflamatórios, sustentando estudos mecanísticos em contextos do sistema nervoso e relevantes à imunidade.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PACAP (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Adcyap1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Adcyap1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Adcyap1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PACAP.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Adcyap1 para a investigação da sinalização de PACAP, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Adcyap1 críticos para a função PACAP
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Adcyap1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo PACAP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PACAP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Adcyap1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo PACAP Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PACAP (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Adcyap1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Adcyap1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.