PABP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400688-ACT

O PABPC1 humano codifica a proteína ligadora de poli(A) (PABP), um regulador central do metabolismo do mRNA citoplasmático que se liga às caudas poli(A) 3′ para promover o início da tradução e estabilizar os transcritos. Por meio de interações com fatores de iniciação da tradução e componentes da maquinaria de degradação de mRNA, a PABP coordena a circularização do mRNA, a eficiência translacional e a renovação dependente de desadenilação. O PABPC1 também contribui para a dinâmica de grânulos de estresse e corpos de processamento, conectando o controle translacional às respostas celulares ao estresse. Alterações na atividade da PABP e na expressão de PABPC1 têm sido associadas a programas de expressão gênica desregulados observados no câncer e em interações vírus–hospedeiro, tornando-o relevante para estudos de sinalização oncogênica e modulação da imunidade inata.

PABP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PABPC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PABP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PABPC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PABPC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PABP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PABPC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PABP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PABP em células tumorais com expressão de PABPC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.