p70 S6 kinase β Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400409-ACT

O gene humano **RPS6KB2** codifica a **quinase p70 S6 β**, uma quinase de serina/treonina da família AGC que atua a jusante da sinalização **PI3K–AKT–mTOR**, conectando sinais de nutrientes e de fatores de crescimento à **síntese proteica** e ao **crescimento celular**. Ao fosforilar substratos envolvidos na iniciação da tradução e na biogênese ribossomal, a quinase p70 S6 β ajuda a regular o tamanho celular, a proliferação e a adaptação metabólica em condições ambientais variáveis. A desregulação da sinalização mTOR/S6K é frequentemente estudada no contexto de alterações do metabolismo anabólico e de respostas ao estresse no câncer e em outras doenças proliferativas, nas quais o controle traducional aberrante e a sinalização de retroalimentação podem remodelar a saída da via. A atividade de RPS6KB2 também é relevante para investigações sobre sinalização de insulina, bioenergética celular e comunicação cruzada com processos associados a MAPK e à autofagia.

p70 S6 kinase β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RPS6KB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

p70 S6 kinase β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RPS6KB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RPS6KB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de p70 S6 kinase β. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RPS6KB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de p70 S6 kinase β no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via p70 S6 kinase β em células tumorais com expressão de RPS6KB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.