p57 Kip2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400444-NIC

CDKN1Cは、サイクリン依存性キナーゼ阻害因子p57 Kip2をコードしており、CDK活性を抑えて細胞周期からの離脱を促し、分化を支えることで、G1/S移行を負に制御する重要な因子です。主に母性アレルから発現するインプリンティング遺伝子として、CDKN1Cは発生過程の成長プログラムや組織恒常性の調整に関与し、増殖、アポトーシス、系譜決定を制御する経路と交差します。CDKN1Cの発現や機能の異常は成長制御の破綻と関連し、発達期の過成長表現型や腫瘍生物学への関与も示唆されていることから、細胞周期チェックポイントを研究する上で有用な標的となります。ヒト細胞では、p57 Kip2は老化様状態や、増殖シグナルおよびストレスに対する文脈依存的な応答とも関連しています。

p57 Kip2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CDKN1C 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CDKN1C内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CDKN1Cの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CDKN1Cが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。