Plásmido Doble Nickase (h) p53: sc-416469-NIC

TP53 codifica el supresor tumoral humano p53, un factor de transcripción específico de secuencia que integra señales de estrés celular para coordinar las respuestas al daño del ADN, la detención del ciclo celular, la senescencia y la apoptosis. La actividad de p53 se regula mediante modificaciones postraduccionales y control por retroalimentación a través del eje MDM2, y modula vías que incluyen los puntos de control G1/S y G2/M, la recombinación homóloga y la reparación por escisión de nucleótidos. La alteración de la función de TP53 modifica la estabilidad genómica, las decisiones de destino celular y los programas transcripcionales vinculados a la transformación oncogénica. TP53 se encuentra entre los genes que con mayor frecuencia se alteran en los cánceres humanos, lo que convierte a p53 en un nodo central para estudiar la señalización por estrés, el mantenimiento del genoma y la biología tumoral.

p53 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TP53 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TP53. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TP53. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TP53 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.