p38 gamma MAPK12 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424361-ACT

Mapk12 codifica a p38 gama (MAPK12), uma quinase proteica ativada por estresse da família MAPK (mitogen-activated protein kinase) que integra sinais extracelulares para regular programas de transcrição que controlam a diferenciação celular, o metabolismo e a sobrevivência. A p38 gama participa de redes de sinalização MAPK a jusante de citocinas inflamatórias e do estresse ambiental, influenciando cascatas de fosforilação que moldam a expressão gênica e a dinâmica do citoesqueleto. Em sistemas murinos, a atividade de MAPK12 tem sido associada a respostas específicas de tecido no músculo esquelético e à sinalização relevante para o sistema imune, tornando-a útil para estudar adaptação ao estresse e o crosstalk entre quinases dependente do contexto. A desregulação da via p38 é frequentemente investigada em modelos de inflamação, desequilíbrio metabólico e reprogramação de sinalização associada ao câncer, nos quais MAPK12 pode atuar como um nó que modula a amplitude e a especificidade da via.

p38 gamma MAPK12 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mapk12 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

p38 gamma MAPK12 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mapk12 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mapk12, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de p38 gamma MAPK12. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mapk12 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de p38 gamma MAPK12 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via p38 gamma MAPK12 em células tumorais com expressão de Mapk12 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.