p38 alpha MAPK14 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424051-ACT

Mapk14 codifica a p38 alfa (MAPK14), uma quinase de serina/treonina ativada por estresse que integra citocinas inflamatórias, sinais de receptores do tipo Toll e estresse ambiental em cascatas de fosforilação que controlam a transcrição, a estabilidade do mRNA e a tradução proteica. Em células de camundongo, a p38 alfa regula ATF2, ELK1 e módulos de quinases a jusante, como MAPKAPK2/3, moldando a produção de mediadores, incluindo TNF e IL-6, e influenciando pontos de verificação do ciclo celular e a apoptose. Essa via faz interface com a sinalização de NF-κB e de interferons, ligando a atividade de MAPK14 às respostas imunes inatas e à homeostase tecidual. A sinalização de p38 desregulada é amplamente utilizada como um nó mecanístico em modelos de doença inflamatória, estresse metabólico, neuroinflamação e sinalização microambiental associada ao câncer.

p38 alpha MAPK14 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mapk14 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

p38 alpha MAPK14 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mapk14 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mapk14, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de p38 alpha MAPK14. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mapk14 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de p38 alpha MAPK14 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via p38 alpha MAPK14 em células tumorais com expressão de Mapk14 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.