Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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p35 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400431
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- p35 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico p35, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:p35 Anticorpo (B-1): sc-518009
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
p35 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400431 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
CDK5R1 codifica a p35, uma subunidade regulatória enriquecida em neurônios que se liga e ativa a quinase dependente de ciclina 5 (CDK5) para controlar a atividade da quinase no espaço e no tempo em membranas e no interior de neuritos. O complexo CDK5–p35 coordena a migração neuronal, a orientação axonal, a sinaptogênese e a plasticidade sináptica dependente de atividade por meio da fosforilação de proteínas do citoesqueleto e de sinalização, conectando-o a vias que regulam a dinâmica de microtúbulos e de actina. A desregulação do turnover de p35 e sua conversão em p25 pode prolongar a atividade de CDK5 e perturbar a proteostase, contribuindo para mecanismos estudados em neurodegeneração e estresse excitotóxico. Alterações na expressão de CDK5R1 ou na sinalização CDK5–p35 também têm sido investigadas em contextos como epilepsia, fenótipos do neurodesenvolvimento e respostas neuronais a lesão.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO p35 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CDK5R1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CDK5R1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CDK5R1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína p35.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CDK5R1 para a investigação da sinalização de p35, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CDK5R1 críticos para a função p35
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CDK5R1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo p35 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo p35 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CDK5R1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo p35 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR p35 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CDK5R1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CDK5R1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.