p300 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-435902-ACT

O gene **Ep300** de camundongo codifica a p300, um coativador transcricional de ampla atuação e uma acetiltransferase de lisina que acetila histonas e diversos substratos não histônicos para regular a acessibilidade da cromatina e programas de expressão gênica. A p300 integra sinais de vias como TGF-β/SMAD, Wnt/β-catenina, sinalização por receptores nucleares e respostas à hipóxia por meio de interações proteína–proteína e ligação a enhancers, moldando decisões de destino celular, proliferação e respostas ao estresse. A atividade de Ep300 influencia a função de enhancers e super-enhancers, respostas a dano no DNA e redes transcricionais inflamatórias, tornando-a central para o controle epigenético do desenvolvimento e da homeostase tecidual. A desregulação da acetilação e da coativação dependentes de p300 está associada a diferenciação alterada e a reprogramação transcricional observadas em múltiplos contextos biológicos relevantes para doenças, incluindo modelos de câncer e estados inflamatórios.

p300 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ep300 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

p300 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ep300 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ep300, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de p300. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ep300 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de p300 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via p300 em células tumorais com expressão de Ep300 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.