P2Y2 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-422096-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- P2Y2O plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase P2Y2 (m) e o Plasmídeo Double Nickase P2Y2 (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para P2ry2. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:P2Y2 Anticorpo (H-5): sc-518121
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
P2Y2 Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-422096-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
P2Y2 Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-422096-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O gene murino **P2ry2** codifica o recetor **P2Y2**, um recetor purinérgico acoplado à proteína G, ativado por **ATP** e **UTP** extracelulares, que se acopla principalmente a **Gq/11** para estimular a **fosfolipase C**, a mobilização de cálcio dependente de **IP3** e a sinalização **PKC/MAPK**. O P2Y2 regula o transporte epitelial de iões e fluidos, a depuração mucociliar e a mecanotransdução, e modula a remodelação do citoesqueleto, a migração celular e a produção de citocinas em múltiplos tecidos. Por estas vias, o P2Y2 contribui para a sinalização da imunidade inata e para respostas inflamatórias, com relevância de investigação para a biologia das vias aéreas, a remodelação vascular e modelos de lesão, reparação e regeneração tecidular. A desregulação da sinalização purinérgica envolvendo o P2Y2 tem sido estudada em contextos de inflamação crónica e fibrose, bem como no microambiente tumoral e em processos metastáticos em sistemas experimentais.
P2Y2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus P2ry2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de P2ry2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função P2ry2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com P2ry2 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.