P2Y2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422096

概要

P2ry2は、細胞外ATPおよびUTPによって活性化されるGタンパク質共役型のプリン作動性受容体であるマウスP2Y2受容体をコードします。P2Y2シグナルは主にGq/11に共役してホスホリパーゼCを活性化し、イノシトールリン酸の産生、細胞内Ca²⁺動員、さらに下流のMAPKおよびPI3K/AKT経路の活性化を引き起こすことで、転写応答や細胞骨格応答を形作ります。P2Y2は、イオン輸送、走化性、分泌の制御を介して、上皮バリアの生理機能、内皮応答、炎症性微小環境における自然免疫シグナル伝達に寄与します。P2Y2を含むプリン作動性シグナルの破綻は、気道および腸管の炎症、線維化に関連したリモデリング、腫瘍関連の間質および免疫相互作用と関連づけられており、疾患機序研究における重要性が示されています。

P2Y2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるP2ry2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、P2ry2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、P2ry2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、P2Y2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、P2Y2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、P2ry2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• P2Y2の機能に不可欠なP2ry2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、P2ry2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• P2Y2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびP2Y2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、P2ry2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  P2Y2 HDRプラスミド（m）および P2Y2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはP2ry2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のP2ry2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。