P2Y1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401759

Visão geral

P2RY1 codifica o receptor humano P2Y1, um receptor purinérgico acoplado à proteína G, ativado principalmente por ADP extracelular para iniciar a sinalização via Gq/PLCβ, a mobilização de Ca2+ mediada por IP3 e respostas a jusante das vias PKC/MAPK. O P2Y1 contribui para a regulação da ativação e agregação plaquetária, do tônus vascular e da comunicação intercelular em contextos endoteliais e associados ao sistema imune, por meio da detecção de nucleotídeos. No sistema nervoso, a sinalização de P2Y1 pode modular a atividade glial e a dinâmica das redes sinápticas, conectando sinais purinérgicos a processos inflamatórios e neuromodulatórios. A atividade desregulada de P2RY1 tem sido associada a fenótipos trombóticos e cardiovasculares e é estudada no contexto mais amplo da neuroinflamação e da sinalização no microambiente tumoral, em que nucleotídeos extracelulares moldam o comportamento celular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO P2Y1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene P2RY1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do P2RY1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do P2RY1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína P2Y1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de P2RY1 para a investigação da sinalização de P2Y1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) P2RY1 críticos para a função P2Y1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos P2RY1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo P2Y1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo P2Y1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus P2RY1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo P2Y1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR P2Y1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia P2RY1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo P2RY1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.