P2Y1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401759

Übersicht

P2RY1 kodiert den humanen P2Y1-Rezeptor, einen G‑Protein-gekoppelten purinergen Rezeptor, der vor allem durch extrazelluläres ADP aktiviert wird und dadurch die Gq/PLCβ-Signalkaskade, eine IP3-vermittelte Ca2+-Mobilisierung sowie nachgeschaltete Antworten über PKC/MAPK-Signalwege auslöst. P2Y1 trägt über die Wahrnehmung von Nukleotiden zur Regulation der Thrombozytenaktivierung und -aggregation, des Gefäßtonus sowie der interzellulären Kommunikation in endothelialen und immunassoziierten Kontexten bei. Im Nervensystem kann die P2Y1-Signalübertragung die Aktivität von Gliazellen und die Dynamik synaptischer Netzwerke modulieren und damit purinerge Signale mit inflammatorischen und neuromodulatorischen Prozessen verknüpfen. Eine fehlregulierte P2RY1-Aktivität wurde mit thrombotischen und kardiovaskulären Phänotypen in Verbindung gebracht und wird zudem im weiteren Kontext von Neuroinflammation und Signalprozessen in der Tumormikroumgebung untersucht, in denen extrazelluläre Nukleotide das Zellverhalten prägen.

Das P2Y1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des P2RY1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des P2RY1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von P2RY1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die P2Y1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von P2RY1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der P2Y1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf P2RY1-Exone abzielen, die für die P2Y1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere P2RY1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom P2Y1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom P2Y1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des P2RY1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das P2Y1 HDR-Plasmid (h) und P2Y1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von P2RY1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten P2RY1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.