P2X7 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-400780-LAC-2

O P2RX7 humano codifica o recetor purinérgico P2X7, um canal catiónico ativado por ATP que promove a entrada de Na⁺/Ca²⁺ e a saída de K⁺ para regular a despolarização da membrana, a maturação de citocinas e, sob estimulação sustentada, a formação de um poro de grande condutância associado a programas de morte celular. O P2X7 é um modulador-chave da sinalização imunitária inata, fazendo a ponte entre a deteção de ATP extracelular e a ativação do inflamassoma (incluindo o NLRP3), o processamento de IL-1β/IL-18 dependente da caspase-1 e respostas a jusante nas vias NF-κB e MAPK em células mieloides, microglia e outras populações relevantes para a imunidade. A atividade e a expressão desreguladas de P2RX7 têm sido associadas à inflamação crónica e a processos neuroinflamatórios, bem como a alterações da função de células imunitárias em contextos de cancro e autoimunidade. A edição génica de P2RX7 apoia estudos mecanísticos da sinalização purinérgica, da libertação de mediadores inflamatórios, da regulação do fenótipo de células imunitárias e da citotoxicidade dependente do estímulo em modelos celulares fisiologicamente relevantes.

As Partículas de Ativação Lentivirais P2X7 (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de P2RX7 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais P2X7 (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição P2RX7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de P2X7. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo P2RX7 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.