p14ARF/p16 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400018-LAC

O CDKN2A codifica duas proteínas supressoras de tumor, p16INK4a e p14ARF, produzidas a partir de quadros de leitura alternativos que restringem a progressão do ciclo celular e coordenam programas de senescência. A p16INK4a inibe CDK4/6 para manter o RB1 em um estado hipofosforilado, limitando a entrada na fase S dependente de E2F, enquanto a p14ARF estabiliza TP53 ao antagonizar MDM2 e promover parada do ciclo celular ou apoptose em resposta ao estresse oncogênico. Por meio dessas conexões com os eixos de RB e p53, o CDKN2A integra a sinalização mitogênica ao controle de checkpoints, às respostas a dano no DNA e a alterações transcricionais associadas ao envelhecimento. A regulação alterada de CDKN2A é frequentemente associada à proliferação desregulada, à senescência prejudicada e a fenótipos tumorigenicidade, tornando-o um nó central para estudos mecanísticos em biologia do câncer e no controle do destino celular.

As Partículas de Ativação Lentivirais p14ARF/p16 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de CDKN2A numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais p14ARF/p16 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição CDKN2A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de p14ARF/p16. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo CDKN2A e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.