p130 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400721-ACT

ヒトRBL2は、レチノブラストーマ様タンパク質p130（RB2）をコードしており、E2F転写因子と協調してG0/G1期停止を促進し、S期遺伝子の発現を抑制するポケットタンパク質です。p130はDREAM複合体の主要なエフェクターとして、細胞周期の休止プログラムを統合し、サイクリン依存性キナーゼ（CDK）シグナルを転写抑制へと結び付けます。増殖・分化・細胞老化関連の遺伝子ネットワークの制御を介して、RBL2/p130活性の変化は、細胞周期制御の破綻やゲノム安定性に関わる文脈でしばしば検討されます。p130–E2F制御のバランス異常は、ヒト細胞におけるがん化シグナルの作用機序研究や腫瘍抑制経路の攪乱に関する研究において重要です。

p130 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RBL2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

p130 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RBL2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRBL2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性p130の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRBL2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるp130依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRBL2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるp130経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。