p120 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400943-ACT

CTNND1 codifica a p120-catenina (p120), uma proteína com repetições armadillo que se liga à região justamembranar das caderinas clássicas e estabiliza as junções aderentes ao limitar a endocitose e a renovação (turnover) das caderinas. Ao coordenar os complexos caderina–catenina com a sinalização de GTPases da família Rho, a p120 influencia a dinâmica do citoesqueleto de actina, a polaridade epitelial e o controle de crescimento dependente de contato, conectando-se a vias que regulam a migração celular e a morfogênese tecidual. Alterações na expressão de CTNND1 ou na localização da p120 têm sido associadas a programas de adesão célula–célula desorganizados e a fenótipos invasivos em modelos de câncer, e a perturbação de CTNND1 também é estudada no contexto de distúrbios do desenvolvimento que afetam a biologia craniofacial e epitelial.

p120 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CTNND1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

p120 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CTNND1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CTNND1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de p120. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CTNND1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de p120 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via p120 em células tumorais com expressão de CTNND1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.