P-Selectin/CD62P/SELP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400441

Visão geral

SELP codifica a P-selectina (CD62P), um recetor de adesão induzível armazenado nos grânulos α das plaquetas e nos corpos de Weibel–Palade das células endoteliais, sendo rapidamente exposta na superfície celular após estímulos inflamatórios ou trombóticos. A P-selectina de superfície liga-se à PSGL-1 nos leucócitos para mediar a captura e o rolamento no endotélio ativado e as interações plaqueta–leucócito, acoplando a dinâmica de adesão à sinalização a jusante que sustenta o recrutamento de leucócitos e a inflamação vascular. Este eixo cruza-se com cascatas de adesão mediadas por selectinas, ativação plaquetária e vias inflamatórias associadas à coagulação, moldando a ativação endotelial e o tráfego de células imunitárias. A expressão ou atividade desregulada de SELP é frequentemente investigada em modelos de trombose, aterosclerose, lesão por isquemia-reperfusão e doenças inflamatórias, em que o crosstalk entre plaquetas, endotélio e leucócitos contribui para a patologia.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO P-Selectin/CD62P/SELP (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SELP em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SELP, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SELP na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína P-Selectin/CD62P/SELP.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SELP para a investigação da sinalização de P-Selectin/CD62P/SELP, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SELP críticos para a função P-Selectin/CD62P/SELP
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SELP para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo P-Selectin/CD62P/SELP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo P-Selectin/CD62P/SELP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SELP. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo P-Selectin/CD62P/SELP Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR P-Selectin/CD62P/SELP (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SELP para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SELP definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.