P-Selectin/CD62P/SELP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400441

概要

SELP は P-セレクチン（CD62P）をコードしており、P-セレクチンは血小板の α 顆粒および内皮細胞の Weibel–Palade 小体に貯蔵される誘導性の接着受容体です。炎症性または血栓性の刺激を受けると、速やかに細胞表面へ発現します。細胞表面の P-セレクチンは白血球上の PSGL-1 に結合し、活性化内皮上での白血球の捕捉（テザリング）とローリング、ならびに血小板—白血球相互作用を介して、接着ダイナミクスを下流シグナルへと連結し、白血球動員と血管炎症を支えます。この軸は、セレクチン媒介性接着カスケード、血小板活性化、凝固に関連した炎症経路と交差し、内皮活性化や免疫細胞トラフィッキングの形成に関与します。SELP の発現や活性の破綻は、血栓症、動脈硬化、虚血再灌流障害、炎症性疾患などのモデルで、血小板—内皮—白血球のクロストークが病態に寄与することから、しばしば研究対象となっています。

P-Selectin/CD62P/SELP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSELP遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SELP内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SELPのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、P-Selectin/CD62P/SELPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、P-Selectin/CD62P/SELPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SELP欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• P-Selectin/CD62P/SELPの機能に不可欠なSELPエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SELPゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• P-Selectin/CD62P/SELP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびP-Selectin/CD62P/SELP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SELP遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  P-Selectin/CD62P/SELP HDRプラスミド（h）および P-Selectin/CD62P/SELP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSELPホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSELP標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。