Oxr1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-431284-ACT

Oxr1 (resistência à oxidação 1) em camundongo codifica uma proteína responsiva ao estresse que sustenta a resiliência neuronal e celular ao dano oxidativo, modulando a homeostase redox e preservando a integridade do genoma. Oxr1 está implicado na função mitocondrial, na desintoxicação de espécies reativas de oxigênio e em vias de resposta a danos no DNA que influenciam a sobrevivência celular sob estresse metabólico ou ambiental. A perturbação da expressão de Oxr1 tem sido associada a fenótipos relevantes para a neurodegeneração e a maior sensibilidade à lesão oxidativa, tornando-o útil para estudar mecanismos de manutenção neuronal e adaptação ao estresse. Como regulador da tolerância ao estresse oxidativo, Oxr1 oferece um alvo acessível para dissecar o crosstalk entre disfunção mitocondrial, sinalização de dano ao DNA e proteostase.

Oxr1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Oxr1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Oxr1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Oxr1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Oxr1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Oxr1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Oxr1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Oxr1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Oxr1 em células tumorais com expressão de Oxr1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.