Partículas Lentivirales de Activación (m) Ox40: sc-423560-LAC

Mouse Tnfrsf4 codifica OX40 (CD134), una molécula coestimuladora de la superfamilia de receptores del TNF inducida en linfocitos T activados y en algunos subconjuntos linfoides innatos. La interacción de OX40 con OX40L favorece la expansión clonal, la supervivencia y la diferenciación hacia memoria de los linfocitos T mediante señalización dependiente de TRAF que activa las vías NF-κB, MAPK y PI3K/AKT y moldea los programas de citocinas. La señalización de OX40 modula el equilibrio entre Treg y células efectoras y contribuye a las reacciones del centro germinal y a las respuestas de anticuerpos. La actividad desregulada de OX40 se ha implicado en la fisiopatología inflamatoria y autoinmune y en la regulación inmunitaria dentro de microambientes asociados a tumores, lo que la convierte en un nodo útil para estudios de inmunología mecanística.

Las partículas de activación lentiviral Ox40 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Tnfrsf4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Ox40 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Tnfrsf4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Ox40. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Tnfrsf4 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.