OX2R Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-425439-LAC

Cd200r1 codifica OX2R (CD200R1), un immunorecettore inibitorio espresso prevalentemente nelle cellule della linea mieloide, inclusi macrofagi, cellule dendritiche e microglia. Il legame con il suo ligando CD200 attenua la segnalazione infiammatoria e contribuisce a mantenere l’omeostasi immunitaria dei tessuti limitando i programmi di attivazione a valle dei recettori dell’immunità innata e delle vie delle citochine. La regolazione mediata da OX2R influenza la funzione delle cellule presentanti l’antigene, le risposte fagocitiche e l’equilibrio tra espressione genica pro- e anti-infiammatoria nei tessuti periferici e nel sistema nervoso centrale. Un’alterazione della segnalazione CD200–CD200R1 è stata associata a stati neuroinfiammatori modificati e a patologie immunomediate, rendendo Cd200r1 un bersaglio utile per studi meccanicistici sul controllo dell’infiammazione.

Le particelle di attivazione lentivirale OX2R (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Cd200r1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale OX2R (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Cd200r1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di OX2R. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Cd200r1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.