osteopontin/OPN/SPP1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400219-NIC

SPP1はオステオポンチン（OPN）をコードしており、OPNは分泌型のリン酸化糖タンパク質であると同時に、細胞外マトリックス（ECM）に結合するサイトカインとして機能し、細胞接着・遊走・生存を制御します。OPNはインテグリン（例：αvβ3）やCD44を介してシグナルを伝達し、フォーカルアドヒージョンの動態、細胞骨格の再編成、ならびにPI3K–AKT、MAPK/ERK、NF-κBなどの下流経路を調節します。免疫細胞や間質系細胞など複数の細胞種で発現し、炎症シグナル、マクロファージの分極、組織リモデリングプログラムに寄与します。SPP1/OPNの発現異常は、がんの浸潤・転移、線維化、慢性炎症性疾患でしばしば研究対象となっており、細胞外からの刺激を、遊走促進・生存促進の転写応答へと結び付ける機序上の結節点として位置付けられています。

osteopontin/OPN/SPP1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SPP1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SPP1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SPP1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SPP1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。