OSM Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404957-ACT

A oncostatina M (OSM) é uma citocina pleiotrópica da família da IL-6 que sinaliza principalmente por meio de OSMR ou LIFR em combinação com a gp130 para regular a inflamação, a remodelação tecidual e a comunicação cruzada entre células hematopoéticas e estromais. A estimulação por OSM ativa as vias JAK/STAT (notadamente STAT3), MAPK/ERK e PI3K/AKT, remodelando programas transcricionais que influenciam a proliferação celular, a diferenciação, a renovação da matriz extracelular e a função de barreira. Na biologia humana, a atividade desregulada de OSM tem sido associada a microambientes inflamatórios crônicos e à remodelação fibrótica, com relevância adicional para o estroma associado a tumores, a sinalização angiogênica e o recrutamento de células imunes. Essas características tornam a OSM um nó útil para estudar redes transcricionais impulsionadas por citocinas, sinalização parácrina e o acoplamento de vias entre compartimentos imunes e não imunes.

OSM O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de OSM sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OSM O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus OSM em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição OSM, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OSM. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus OSM nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OSM no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OSM em células tumorais com expressão de OSM silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.