ORMDL3CRISPR激活质粒(h): sc-403587-ACT

ORMDL3（orosomucoid-like 3，类甲型糖蛋白3）是一种内质网膜蛋白，通过调控丝氨酸棕榈酰转移酶（serine palmitoyltransferase）的活性，作为鞘脂稳态的关键调节因子，从而影响神经酰胺的生成以及膜脂组成。借助其在内质网脂质代谢中的作用，ORMDL3 会影响钙信号传导、内质网应激反应以及炎症通路的基础活性水平，将细胞稳态与免疫激活联系起来。ORMDL3 的遗传变异和表达失调与哮喘易感性及其他炎症表型相关，提示其与气道生物学和免疫代谢密切相关。研究人员常常通过研究 ORMDL3 来理解由脂质驱动的信号传导与内质网蛋白稳态（proteostasis）如何塑造细胞因子反应、上皮功能以及应激适应性程序。

ORMDL3 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ORMDL3的表达。

ORMDL3 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ORMDL3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ORMDL3转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性ORMDL3表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ORMDL3位点，并能够研究内源性位点上依赖于ORMDL3的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ORMDL3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ORMDL3通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。