Orexin-A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400357
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Orexin-A O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Orexin-A, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Orexin-A Anticorpo (KK09): sc-80263
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Orexin-A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400357 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
HCRT codifica a pré-pro-orexina, que é processada nos neuropeptídeos orexina-A (hipocretina-1) e orexina-B, os quais atuam por meio da sinalização de GPCR dos receptores OX1R/HCRTR1 e OX2R/HCRTR2. A orexina-A é um modulador-chave do estado de alerta e da vigilância, acoplando o estado metabólico neuronal à excitabilidade sináptica por vias dependentes de cAMP/PKA, de Ca2+ e associadas a MAPK/ERK, em circuitos do hipotálamo e do tronco encefálico. Além de regular as transições sono–vigília, a sinalização por orexina influencia o comportamento alimentar, o processamento de recompensa, as respostas ao estresse e a saída autonômica. A desregulação do eixo HCRT/orexina está associada a distúrbios do ciclo sono–vigília e contribui para fenótipos neurocomportamentais relevantes para a pesquisa metabólica e psiquiátrica.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Orexin-A (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene HCRT em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do HCRT, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do HCRT na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Orexin-A.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de HCRT para a investigação da sinalização de Orexin-A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) HCRT críticos para a função Orexin-A
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos HCRT para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Orexin-A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Orexin-A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus HCRT. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Orexin-A Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Orexin-A (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia HCRT para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo HCRT definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.