OPN1SW CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400755-ACT

OPN1SWは、短波長感受性オプシン（Sオプシン）をコードしており、青色光の検出を担う、錐体視細胞外節に局在するGタンパク質共役型受容体です。光子を吸収すると、OPN1SWはトランスデューシン依存性の視覚情報伝達（フォトトランスダクション）を活性化し、cGMPホスホジエステラーゼ経路のシグナル伝達、cGMP作動性イオンチャネルの閉鎖、ならびに視覚シグナルを形成する膜電位の下流変化を引き起こします。錐体機能、分光感度の調整、網膜回路への統合には、適切なOPN1SWの発現と発色団結合が必要です。オプシン活性の変化や錐体視細胞の機能障害は、遺伝性の色覚異常や、より広範な網膜変性過程とも関連しており、錐体生物学の機序研究を支持します。

OPN1SW CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性OPN1SWの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OPN1SW CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における OPN1SW 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はOPN1SW転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OPN1SWの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のOPN1SW遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOPN1SW依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびOPN1SW発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOPN1SW経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。