Oma1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402953-ACT

O OMA1 humano codifica a metaloprotease Oma1 da membrana interna mitocondrial, um regulador responsivo ao estresse do controle de qualidade mitocondrial. A Oma1 é ativada pela despolarização mitocondrial e pelo estresse proteotóxico para processar substratos-chave como a OPA1, influenciando assim o equilíbrio entre fusão e fissão mitocondrial, a arquitetura das cristas e a capacidade de fosforilação oxidativa. Por meio do acoplamento às respostas mitocondriais a proteínas mal dobradas, ao início da mitofagia e à sinalização apoptótica, a Oma1 integra o estresse bioenergético à remodelação da organela. A desregulação do eixo OMA1–OPA1 tem sido associada a dinâmica mitocondrial alterada e foi estudada em contextos que incluem neurodegeneração, disfunção cardiometabólica e adaptação de células cancerosas ao estresse.

Oma1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de OMA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Oma1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus OMA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição OMA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Oma1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus OMA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Oma1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Oma1 em células tumorais com expressão de OMA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.