OLIG1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402725-ACT

OLIG1 (fator de transcrição de oligodendrócitos 1) é um fator de transcrição do tipo hélice–alça–hélice básico (bHLH) que regula a especificação da linhagem de oligodendrócitos, a maturação e a expressão de genes de mielina no sistema nervoso central humano. Ele atua em redes transcricionais do desenvolvimento juntamente com fatores bHLH relacionados e coopera com vias de sinalização que coordenam decisões de destino de progenitores neurais e a diferenciação glial. Programas dependentes de OLIG1 moldam a cromatina e estados transcricionais que influenciam a capacidade de remielinização e as respostas celulares à lesão. A atividade desregulada de OLIG1 ou a diferenciação alterada de oligodendrócitos tem sido implicada em contextos desmielinizantes e do neurodesenvolvimento, sustentando seu uso como alvo para estudos mecanísticos de mielinização e biologia glial.

OLIG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de OLIG1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OLIG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus OLIG1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição OLIG1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OLIG1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus OLIG1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OLIG1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OLIG1 em células tumorais com expressão de OLIG1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.