Olfr666 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-435166-LAC

Olfr666 codifica um receptor olfatório em camundongo, integrante da grande superfamília de receptores acoplados à proteína G (GPCR), que detecta ligantes odorantes e inicia a transdução de sinais sensoriais. Após a ativação, receptores olfatórios tipicamente se acoplam a proteínas G para estimular a adenilil ciclase, elevar os níveis de AMPc e abrir canais iônicos dependentes de nucleotídeos cíclicos, convertendo pistas químicas em atividade neuronal. Embora classicamente associados aos neurônios sensoriais olfatórios, já foi relatada a expressão ectópica de alguns receptores olfatórios em tecidos não olfatórios, o que motiva estudos da sinalização de GPCR para além do olfato. A desregulação de vias mediadas por GPCR é amplamente relevante para a neurobiologia e para a homeostase celular, oferecendo justificativa para investigar a expressão e a função de Olfr666 em modelos sensoriais e de sinalização.

As Partículas de Ativação Lentivirais Olfr666 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Olfr666 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Olfr666 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Olfr666, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Olfr666. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Olfr666 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.