Olfr1261 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-434614-LAC

Olfr1261 codifica um receptor olfatório em camundongo que pertence à superfamília de GPCRs de classe A (semelhantes à rodopsina) e prevê-se que se acople à sinalização por proteína G em neurônios quimiossensoriais. Na via canônica de transdução olfatória, a ativação do receptor de odorantes promove a produção de cAMP dependente de Golf/ADCY3 e a atividade subsequente de canais regulados por nucleotídeos cíclicos, conectando o engajamento do receptor à despolarização neuronal e a programas gênicos dependentes de atividade. Embora estejam associados principalmente à detecção de odores, membros da família de receptores olfatórios também podem apresentar expressão ectópica em tecidos não olfatórios, onde a sinalização por GPCR pode influenciar o metabolismo celular, a diferenciação ou a sinalização inflamatória de maneiras dependentes do contexto. Alterações na sinalização e nos padrões de expressão de receptores olfatórios são frequentemente investigadas como biomarcadores do estado neuronal e em modelos de disfunção sensorial relevantes para estudos de neurodegeneração e de exposição ambiental.

As Partículas de Ativação Lentivirais Olfr1261 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Olfr1261 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Olfr1261 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Olfr1261, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Olfr1261. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Olfr1261 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.