Plásmido CRISPR de Activación (m) OGG1: sc-422012-ACT

Mouse Ogg1 codifica la ADN glicosilasa 1 de 8-oxoguanina (OGG1), una enzima clave de la reparación por escisión de bases que reconoce y elimina purinas oxidadas como la 8-oxoG para prevenir transversiones de G:C a T:A. Al iniciar la reparación en sitios de daño oxidativo del ADN, OGG1 ayuda a preservar la estabilidad del genoma en el contexto de la exposición a especies reactivas de oxígeno mitocondriales y nucleares. La actividad de OGG1 se interseca con las respuestas al estrés oxidativo, los procesos de reparación asociados a la replicación y las vías de control de la mutagénesis que influyen en el envejecimiento celular y la señalización inflamatoria. La función o regulación alteradas de OGG1 se estudian con frecuencia en modelos de susceptibilidad al cáncer, neurodegeneración, disfunción metabólica y otras afecciones vinculadas a una carga elevada de daño oxidativo.

OGG1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ogg1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

OGG1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ogg1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ogg1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de OGG1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ogg1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de OGG1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía OGG1 en células tumorales con expresión de Ogg1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.