OGG1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422012-ACT

O Ogg1 de camundongo codifica a DNA glicosilase 1 de 8-oxoguanina (OGG1), uma enzima-chave do reparo por excisão de bases que reconhece e remove purinas oxidadas, como a 8-oxoG, para prevenir transversões de G:C para T:A. Ao iniciar o reparo em locais de dano oxidativo no DNA, a OGG1 ajuda a preservar a estabilidade do genoma no contexto da exposição a espécies reativas de oxigênio mitocondriais e nucleares. A atividade da OGG1 se cruza com respostas ao estresse oxidativo, processos de reparo associados à replicação e vias de controle da mutagênese que influenciam o envelhecimento celular e a sinalização inflamatória. Alterações na função ou na regulação da OGG1 são frequentemente estudadas em modelos de suscetibilidade ao câncer, neurodegeneração, disfunção metabólica e outras condições ligadas a uma carga elevada de dano oxidativo.

OGG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ogg1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OGG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ogg1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ogg1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OGG1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ogg1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OGG1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OGG1 em células tumorais com expressão de Ogg1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.